液相色譜柱作為高效液相色譜系統(tǒng)的核心分離單元，其性能直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性。長期使用后，樣品殘留、流動相雜質(zhì)及鹽析出物會逐漸降低柱效，甚至引發(fā)拖尾峰或鬼峰。以下是針對不同污染類型的系統(tǒng)性清潔方案及操作要點(diǎn)。?
一、日常維護(hù)性沖洗(適用于輕度污染)?
每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需按以下順序進(jìn)行基礎(chǔ)沖洗以清除可溶性殘留：?
1. 正向沖洗：繼續(xù)保持分析時的流動相比例，以1mL/min流速持續(xù)沖洗30分鐘，逐步置換出柱內(nèi)殘留樣品。?
2. 過渡至強(qiáng)溶劑：切換為含5%~10%乙腈的水溶液，運(yùn)行20個柱體積，溶解弱保留組分。?
3. 高比例有機(jī)相沖洗：改用90%乙腈/水(反相柱)或甲醇/水體系，以1.5mL/min流速沖洗60分鐘，破除疏水性吸附。?
*注意*：避免直接從高水相跳至純有機(jī)相，防止填料因驟縮產(chǎn)生裂隙。?
二、特殊場景處理技巧?
1. 硅藻土預(yù)柱配合：在進(jìn)樣閥前加裝含硅藻土的在線過濾器，可攔截80%以上的顆粒物，顯著減輕主柱負(fù)擔(dān)。?
2. 反向沖洗應(yīng)用：僅適用于耐高壓的不銹鋼柱管填充柱。將進(jìn)出口反接，用高純度有機(jī)溶劑逆向沖洗，可沖出嵌頓在填料深層的微粒。?
3. 超聲輔助再生：對于失效的色譜柱，可將柱體浸沒于甲醇/氯仿混合液中，置于超聲波清洗儀中震蕩30分鐘，重啟部分封閉微孔。?
三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?
嚴(yán)禁操作：不得使用腐蝕性強(qiáng)的濃酸(如王水)或非揮發(fā)性鹽溶液(如磷酸鹽緩沖液)長時間沖洗，以免破壞鍵合相。?
參數(shù)控制：所有沖洗過程流速不宜超過2mL/min，柱溫不超過40℃，防止填料塌陷。?
效果驗(yàn)證：清潔完成后，用萘/苯混合物測定理論塔板數(shù)，恢復(fù)至新柱90%以上方可繼續(xù)使用。?
通過分級式清潔策略，多數(shù)色譜柱可恢復(fù)85%以上的初始效能。建議建立《色譜柱使用日志》，記錄每次清潔條件及效果，當(dāng)理論塔板數(shù)連續(xù)三次低于新柱70%時，應(yīng)及時更換新柱以確保數(shù)據(jù)可靠性。
